Protocole pour réaliser un dosage spectrophotométrique

[Claire (1ère S)]

Bonsoir.

Dans le cadre de TP évalués, je vais être amenée, en 1ère S, à réaliser probablement un dosage à l'aide d'un spectrophotomètre. On a donc, classiquement, des solutions colorées de concentrations variées ainsi qu'une solution dite inconnue donc il s'agira de déterminer la concentration.

D'un point de vue théorique, c'est simple à comprendre, c'est plus de un point de vue pratique que j'ai du mal à comprendre ce qu'il faut faire exactement pour déterminer cette concentration.
Je suis donc preneuse de conseils.
Indication : nous avons fait un TP sur l'eau de Dakin, utilisant, pour une courbe d'étalonnage, le logiciel LatisPro.

[SoS(1)]

Bonjour,

Afin de mieux vous aider, j'ai besoin de savoir certaines petites choses :
Lors du TP sur l'eau de Dakin, est-ce vous qui avez réalisé la courbe d'étalonnage, ou vous l'a-t-on donnée toute tracée ?

[Claire]

Oui, c'était à nous de la tracer à l'aide du logiciel justement, LatisPro.

[SoS(1)]

1 ) Si cela n'est pas préciser dans le protocole, c'est à vous de déterminer à quelle longueur d'onde vous allez tracer la courbe d'étalonnage. Il faut pour cela tracer A en fonction de lambda, et régler ensuite le spectrophotomètre à une longueur d'onde suffisamment absorbée par la solution.
2 ) Préparer différentes solutions de concentrations connues, et mesurer l'absorbance de ces solutions à la longueur d'onde fixée au 1 ) . Vous obtenez la courbe d'étalonnage, qui est une droite qui vérifie la loi de Beer Lambert.
3 ) Mesurer l'absorbance de la solution de Dakin et en déduire, grâce à la courbe d'étalonnage, la concentration de cette solution.

Est ce que lors de ces étapes, quelque chose vous préoccupe particulièrement ?

[Claire]

Oui, j'ai juste du mal avec la première étape. Comment trace-t-on la courbe d'étalonnage si on n'a pas au préalable effectué les mesures avec le spectrophotomètre ? Enfin, je veux dire, comment connaître l'absorbance ?

[SoS(11)]

Bonjour,

Pour cette première étape, il suffit de faire le blanc de placer la cuve avec la solution colorée à étudier et de sélectionner sur le spectrophotomètre la fonction Absorbance en fonction de la longueur d'onde. Le tracé se fait alors automatiquement, le spectrophotomètre réalisant plusieurs mesures d'absorbance pour différentes valeurs de longueurs d'onde.
Au pire si le spectrophotomètre n'a pas cette fonction, vous pouvez faire le blanc pour une longueur d'onde choisi, placer la cuve avec la solution colorée à étudier et relever la valeur d'absorbance. Et refaire les mesures pour d'autres valeurs de longueurs d'onde. Mais c'est laborieux.
A mon avis si le spectro ne dispose pas du tracé automatique, on vous fournira la courbe, afin que vous puissiez choisir à quelle longueur d'onde vous allez faire vos mesures.

Bon courage et à bientôt

[Claire]

Si, le spectrophotomètre trace la courbe en fonction de la solution.
Donc admettons : j'ai quelques solutions filles provenant toutes de la même solution mère qui a été diluée. On me donne une solution inconnue dont je dois déterminer la concentration.
J'imagine que je réalise d'abord l'acquisition pour les solutions données avec le spectro. puis à l'aide de la courbe, je détermine la concentration ? Mais comme je sais son absorbance ?

[SoS(38)]

Bonjour Claire,

Pour chacune des solutions filles de concentrations connues, vous pouvez déterminer l'absorbance A et tracer la courbe d'étalonnage A = f(c) qui est une droite.
Il ne faut pas confondre cette courbe avec la courbe A = f(lambda) précédente qui vous donne avec son maximum, la longueur d'onde lambda à utiliser.

Pour la solution inconnue, vous insérez simplement la solution dans le spectrophotomètre et celui-ci vous donne son absorbance A.

[Claire]

La courbe d'absorbance avec les solutions connues, je la trace avec l'ordinateur ?
Et je ne comprends pas le principe de la seconde courbe avec l'absorbance maximale. Comment ça se passe ?

[SoS(38)]

Bonsoir Claire,

Reprenons.

La première courbe , pour une espèce donnée, est A = f(lambda) . Elle permet de voir, pour la solution étudiée, quelle est la longueur d'onde pour laquelle l'absorbance est maximale. C'est la valeur de longueur d'onde pour laquelle la solution réagit le mieux.

Une fois cette première courbe , tracée, on fixe la longueur d'onde à la valeur trouvée précédemment.
Pour des solutions de concentrations c connues, on détermine les valeurs d'absorbance A et on trace la courbe A=f(c) qui est une droite d'étalonnage ( à la main ou l'ordinateur, cela n'a aucune importance)

Pour une solution de même nature et de concentration inconnue, on peut déterminer l'absorbance A' et par projection sur la droite d'étalonnage on déduit la concentration c' inconnue.

[Claire]

Une fois que l'on a donc sélectionné la longueur d'onde maximale d'absorbance grâce au spectrophotomètre, on réalise l'acquisition des absorbances des solutions données constituant l'échelle des teintes. Enfin, on détermine A de la solution inconnue par lecture graphique.

[SoS(38)]

Bonsoir,

Oui, vous avez synthétisé les informations.